Gastrulation in the horse conceptus: an immunohistochemical study (Gastrulação em equinos: Um estudo imunohistoquímico)

Foi defendida a tese de Mestrado em Produção Animal do Departamento de Ciências Agrárias da Universidade dos Açores de Maria de Magalhães Fraústo Gaivão, com o título: "Gastrulation in the horse conceptus: an immunohistochemical study-(Gastrulação em equinos: Um estudo imunohistoquímico), orientada pelo Professor Tom Stout da Universidade de Utrecht-Holanda e pelo Professor Joaquim Fernando Moreira da Silva do Departamento de Ciências Agrárias da Universidade dos Açores.

O Júri foi constituído, para além dos orientadores, pelos professores:

Doutor Luís Pedro Pinto de Andrade, professor coordenador da Escola Superior Agrária do Instituto Politécnico de Castelo Branco,
Doutora Luísa Maria Leal Mateus, professora auxiliar da Faculdade de Medicina Veterinária da Univerisdade Técnica de Lisboa, e,
Doutor Fernando Jorge da Rocha Pires, professor auxiliar da Universidade dos Açores.

Este trabalho de investigação teve como objectivo definir as etapas iniciais do desenvolvimento embrionário em equinos, analisando a formação dos folhetos embrionários, por forma a contribuir para o estudo comparativo do desenvolvimento embrionário animal.
A fase inicial do desenvolvimento embrionário, nomeadamente o período associado à gastrulação, é crucial e caracterizada por uma série de importantes eventos que diferem entre as várias espécies animais. A informação acerca deste período do desenvolvimento no cavalo é escassa.

Nos equinos, após elevadas taxas de fertilização, verifica-se uma alta taxa de mortalidade embrionária nas primeiras duas semanas de gestação, o período associado com o início da gastrulação. Esta mortalidade tem sido relacionada, principalmente, com alterações a nível do concepto.
Durante a gastrulação ocorre uma massiva reorganização celular que transforma o blastocisto numa entidade complexa, na qual os folhetos embrionários (ectoderme, mesoderme e endoderme) são estabelecidos e organizados em locais específicos, de forma a permitirem a sua diferenciação em todos os tecidos do embrião e membranas associadas. O mais interno destes folhetos, a endoderme, irá dar origem ao intestino e outros órgãos internos. O mais externo, a ectoderme, à pele, cérebro, sistema nervoso e outros tecidos externos. O intermédio, a mesoderme, irá dar origem aos músculos e aos sistemas esquelético e circulatório.
Neste trabalho, foi feito um estudo detalhado da formação dos folhetos embrionários e diferenciação no concepto de equino na fase da gastrulação, tendo sido utilizados os seguintes métodos: avaliação macroscópica e análise de cortes histológicos por histologia convencional (hematoxilina-eosina) e imunohistoquímica. Observámos que a gastrulação, no equino, se inicia no Dia 12 (Dia 0 = dia da ovulação) e que, 18 dias após a ovulação, o concepto completou uma série de estadios bem definidos, permitindo o estabelecimento do embrião propriamente dito e membranas associadas. Estes estadios incluem a formação do disco embrionário, formação da linha primitiva, involução de células do epiblasto através da linha primitiva (dando origem à mesoderme e endoderme), neurulação, diferenciação da mesoderme, angiogénese e estabelecimento de um sistema circulatório embrionário eficaz, no qual se identificam as aortas e veias vitelinas preenchidas com células sanguíneas embrionárias.

Através dos estudos de imunohistoquímica, verificámos uma expressão generalizada das citoqueratinas em todas as células da ectoderme com uma demarcação acentuada na junção ectoderme-trofoblasto. A ausência de expressão da vimentina nas primeiras células mesenquimatosas móveis identificadas, permitiu-nos concluir que a vimentina, no cavalo, não pode ser associada, como acontece noutras espécies, com a diferenciação da mesoderme a partir do epiblasto e início da gastrulação. De facto, só no dia 14 após a ovulação é que identificámos células mesenquimatosas marcadas com vimentina. Estas encontravam-se lateralmente à linha primitiva e na porção posterior do embrião. Este padrão de marcação da vimentina sugere diferentes “destinos" das células mesenquimatosas primárias. É também possível que, após movimentos morfogenéticos, estas mesmas células respondam à sua nova localização trocando a expressão de filamentos proteicos. A marcação com α1-fetoproteína, na endoderme primitiva, verificou-se a partir do Dia 10 e intensificou-se nos conceptos mais desenvolvidos. Assim, a endoderme primitiva parece ser o local de síntese desta proteína, tendo em conta o forte e constante padrão de marcação.

Todas estas observações, e quando comparadas com o que acontece nas outras espécies domésticas, sugerem que o padrão de marcação das citoqueratinas, vimentina e α1-fetoproteína nos folhetos embrionários não é uma característica comum ao desenvolvimento embrionário das várias espécies e que existem vários aspectos únicos nas fases iniciais do desenvolvimento do embrião de equino.