Sexagem de embriões bovinos cultivados in vitro. Implementação de técnicas para aumentar a viabilidade após sexagem, congelação e descongelação.

Esta tese de Mestrado em Produção Animal de Isabel Alexandra Teixeira de Venido Carvalhais, orientada pelo Professor Doutor Moreira da Silva, do Departamento de Ciências Agrárias da Universidade dos Açores e pela Professora Doutora Rosa L. N. Pereira da Estação Zootécnica Nacional, teve como objectivo o desenvolvimento de métodos simples e precisos para a sexagem de embriões pré implantatórios e importante para a optimização do maneio reprodutivo bovino em programas de selecção e melhoramento. O objectivo da primeira experiência deste trabalho foi implementar um método de sexagem de embriões bovinos por reacção em cadeia da polimerase (PCR) e avaliar a distribuição de machos e fêmeas em função da qualidade e idade dos embriões produzidos. Os embriões bovinos produzidos in vitro (IVP) com meios suplementados com a soro caracterizaram-se por uma acumulação excessiva de lípidos no citoplasma aliada a uma grande susceptibilidade à congelação. Esta susceptibilidade é acrescida em embriões micromanipulados. A segunda experiência teve como objectivo melhorar a resistência dos embriões IVP a micromanipulação, congelação e descongelação, através da inclusão do isómero conjugado do acido linoléico — CLA (C18:2 trans-10, cis-12) no sistema de cultura tradicional com células da granulosa e soro. De igual modo, testou-se se a presença do CLA diminuía a deposição excessiva de lípidos característica dos embriões IVP e verificou-se se interferia no desenvolvimento embrionário.
Para a experiência 1 realizaram-se 17 sessões de produção de embriões. Oócitos bovinos aspirados de ovários recolhidos no matadouro foram maturados e fertilizados in vitro (FIV=D0). Ao 7º e 8° dia de cultura (TCM199 + 10% soro + células da granulosa), os embriões foram micromanipulados e recolhida uma biópsia para identificação do sexo. Na PCR, em Pit-stop foram utilizados dois pares de iniciadores: o primeiro par, adicionado apenas ao 7° ciclo, reconhece o DNA satélite bovino 1.715 (216 pb) e é amplificado nas fêmeas e nos machos. O 2° par amplifica um fragmento específico do cromossoma Y (174 pb) apenas presente nos machos. A eficiência da determinação do sexo foi inicialmente testada com DNA genómico de sangue de bovino com sexo conhecido e optimizadas as concentrações de DNA, dos iniciadores e de MgCl2 e as temperaturas de emparelhamento autilizar na reacção. A precisão do método foi avaliada por comparação do sexo diagnosticado em biópsias e respectivo embrião (n=14) e em duas biópsias (n=20) do mesmo embrião. Esta precisão foi de 100 e 100%, respectivamente. A eficiência do método para a sexagem dos embriões (n=47), avaliada pelo número de embriões com sexo identificado em relação ao número de embriões biopsiados, foi de 93,6%, podendo o sexo dos embriões ser determinado em 5 horas. A taxa de clivagem (embriões clivados! oócitos inseminados) foi de 73,8 ± 1,8 e de embriões D7-8 (embriões D7-8 embriões clivados) foi de 23,8±1,7%, não havendo diferenças significativas no sexo dos embriões (fêmeas:41% e machos:59%). A idade, a qualidade e o estádio de desenvolvimento não influenciou significativamente a distribuição do sexo dos embriões produzidos no sistema tradicional de cultura com células da granulosa e soro.
A experiência 2 foi realizada em 9 sessões. Oócitos maturados in vitro, 22 horas após a inseminação, foram divididos em dois grupos: TEST (n=822), cultivados com células da granulosa, TCM199, 10% soro e 100 µM GSH, e CLA (n925), cultivados com células da granulosa, TCM199, 10% soro, 100 µM GSH e 100 µM CLA. A co-cultura dos embriões prosseguiu até D7/D8. Embriões D7/D8 (TEST, n=l0, CLA, n=i 1) foram observados a fresco utilizando um microscópio com sistema Nomarski, procedendo-se a avaliação das gotículas lipídicas (GL) através da análise da área das GL e índice de gordura do embrião (IGE). De igual modo, embriões D7/D8 de ambos os grupos foram micromanipulados para diagnóstico do sexo e, posteriormente, congelados por vitrificação (TEST biopsiados n=20:CLA biopsiados, n=20). Também foram congelados embriões não rnicroimanipulados (TEST não biopsiados, n=35; CLA não biopsiados, n=37). Para avaliar a viabilidade destes embriões após congelação/descongelação, os embriões foram descongelados e colocados em cultura com monocamadas de células da granulosa (TCMI99, 10% soro e 100 µM (GSH). A suplementação do meio de cultura de embriões com CLA não influenciou as taxas declivagem e de embriões D7/D8, nem a qualidade ou distribuição do sexo dos embriões produzidos. No entanto, estes embriões têm GL de dimensões menores (TEST 10,33 ± 0,33 µm2vs CLA 7,1 ± 0,2 µm2 P=0,00001) e menores IGE (TEST 36,09 ± 2,33 % vs CLA 19,28 ± 2,87%, P=0,0003). Após a classificação dos embriões através das funções de classificação com base nas variáveis: IGE; área das GL <> 7 µm2 em gordos, médio e magros, verificou-se que os embriões cultivados sem CLA apresentam uma maior quantidade de gordura do que os embriões cultivados com CLA (P=0,008). No grupo TEST existem mais embriões gordos (P=0,004) do que no grupo CLA. Pelo contrário, neste último grupo foram identificados mais embriões médios (P=0,05) do que no grupo TEST. A cultura dos embriões em meios suplementados com CLA melhorou a resistência à congelação/descongelação dos embriões micromanipulados ou não micromanipulados. À descongelação, a taxa de integridade dos embriões do grupo CLA biopsiados foi maior (P=O,02) do que a dos embriões do grupo TEST biopsiados. Também a integridade dos embriões do grupo CLA não biopsiados foi maior (P = 0,02) do que a dos embriões do grupo TEST biopsiados. Após cultura dos embriões descongelados, a taxa de expansão às 24 horas dos embriões do grupo TEST biopsiados é significativamente inferior a todos os outros grupos (TEST, P= 0,03; CLA, P = 0,00008; CLA biopsiado, P= 0,003). Esta taxa é superior no grupo CLA em relação ao grupo TEST às 24 (P=0,06) e 48 (P=0,07) horas de cultura.Os resultados do presente trabalho mostram que o método implementado de recolha da biopsia embrionária por microssecção e PCR multiplex em Pit-stop é simples, preciso, rápido e economicamente comportável, podendo ser utilizado para a sexagem de embriões bovinos a transferir para vacas receptoras em fresco ou após congelação. A inclusão do CLA no sistema de cultura tradicional com células da granulosa e soro diminuiu a deposição de lípidos no citoplasma dos embriões, não interferindo nas taxas de produção ou qualidade dos embriões. A incorporação deste isómero do ácido linóleico no meio de cultura dos embriões permitiu melhorar a resistência dos ebriões IVP à micromanipulação, congelação e descongelação mesmo na presença de soro.

Prosposta de Indicadores de Monitorização Ambiental de POOC na Região Autónoma dos Açores

Nesta tese de Mestrado em Gestão e Conservação da Natureza de Andrea Zita Costa Botelho, orientada pela Professora Doutora Ana Cristina Costa do Departamento de Biologia da Universidade dos Açores, parte-se do princípio que é nas zonas costeiras que se concentra a maior parte da população e das actividades económicas, o que pode constituir uma ameaça ao equilíbrio do ambiente costeiro se a sua disposição e aglomerado não se processar de forma adequada.
Neste estudo pretendeu-se estabelecer um programa de monitorização integrado que permitisse a avaliação da implementação de um eventual plano de ordenamento da orla costeira no Arquipélago Açoriano.
Foi seleccionado um leque de indicadores para avaliar a qualidade ambiental de uma zona de estudo em São Miguel e sua eventual alteração, constituindo assim uma proposta base para um programa de monitorização a nível regional.
Foi efectuada uma análise multicritério que permitiu hierarquizar de modo mais objectivo a importância dos vários indicadores de acordo com a relevância dos impactos e da necessidade de intervenção dentro de cada um dos sectores. Assim sendo, este trabalho constituirá um documento base para a implementação de sistemas semelhantes em áreas adjacentes ao local de estudo (Concelho da Lagoa e de Vila Franca do Campo), e inclusivé, a nível Regional.

Riscos Geológicos Inerentes às Fajãs da Ilha de São Jorge: Casos Específicos das Fajãs Detríticas dos Cubres e de São João.

Esta tese de Aida de Fátima Brasil Vieira, do Mestrado em Gestão e Conservação da Natureza da Universidade dos Açores, foi orientada pela Professora Doutora Zilda França e pelo Professor Doutor João Carlos Nunes, ambos docentes do Departamento de Geociências da Universidade dos Açores.

Nesta tese de Mestrado estudou-se a estabilidade de taludes, na perspectiva de monitorização de possíveis zonas de instabilidade nas Fajãs dos Cubres e de São João, na ilha de São Jorge.
Os movimentos de massa, para além de serem um fenómeno natural de evolução de uma vertente, são muitas vezes resultado da conjugação de diversos factores, nomeadamente tectónicos, precipitação, coberto vegetal, inclinação da vertente, tipo de materiais e acções antropogénicas.
Ao longo deste trabalho consolidou-se a ideia de que o uso do solo e o coberto vegetal são factores condicionantes de possíveis movimentos de massa. Na realidade, a transformação em pastagens, dos terrenos que marginalizam os topos dos taludes, controla a maior ou menor concentração das águas superficiais e potencia a ocorrência de movimentos de massa. Tal facto implica a necessidade de criação de canais de escoamento, desviados da área de influência das fajãs, contrariando assim, a tendência de movimentação de solos incoerentes e saturados em água.A caracterização sócio-económica destes locais permitiu identificar o sentimento de posse e de protecção que os jorgenses têm pelas suas Fajãs, uma vez que não deixam de as procurar, mesmo estando conscientes dos riscos naturais que tais locais encerram.